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    雙熒光素酶報告基因85折促銷

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    地區:上海
    簡介:提供報告基因載體構建,轉染,熒光檢測服務
    提供商:上海英拜生物科技有限公司
    服務名稱:雙熒光素酶報告基因

    英拜公司雙熒光素酶報告基因實驗系統采用熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶組成雙熒光素酶報告基因實驗系統。
        實驗中,一個報告基因(熒火蟲熒光素酶)活力的改變,與基因表達的特定實驗條件相關,而第二個報告基因(海腎熒光素酶)的組成性活力提供了內對照,使實驗值可以規一化。我們在單管中測試兩個熒光素酶報告基因,此兩個熒光素酶報告基因具有兼容的化學特性、操作條件、速度、靈敏度、線性范圍和對儀器參數的要求。熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶測試的組合,提供了雙遺傳報告基因應用的理想測試系統。我們選用的使螢火蟲和海腎熒光素酶具有最適測試的靈敏度和穩定性。

    可檢測的內容:
    1、啟動子活性和轉錄因子結合位點分析實驗
    2、microRNA靶基因驗證實驗
    3、microRNA-circRNA(lncRNA)靶基因驗證實驗

    ■雙熒光素酶報告基因系統的組成

    1.熒光素酶報告基因載體

    ①螢火蟲熒光素酶報告基因載體 pGL3 Luciferase Reporter Vector 具有螢火蟲熒光素酶報告基因,但該報告基因不含啟動子,不能表達螢火蟲熒光素酶。在該報告基因前導入外來啟動子,相應轉錄因子與外來啟動子結合,影響熒光素酶報告基因的表達。我們首先根據需要檢測的轉錄因子(TF,transcription factor),選擇與之對應的promotor/TRE(transcription response element),并將這個promotor/TRE的啟動序列克隆到載體上(位置與報告基因相鄰),然后將載體質粒轉入細胞,如果細胞內TF具有活性,TF與promotor/TRE結合,熒光素酶報告基因得到表達,熒光強度發生變化;反之,如果細胞內相應的TF沒有活性,熒光素酶報告基因在細胞內不表達。我們利用靈敏的Bethord 公司的Lumat LB9507熒光檢測儀來檢測細胞內報告基因的熒光強度,從而對轉錄因子進行活性分析。

     

     

    ②海腎熒光素酶報告基因載體phRL-SV40 Vector 具有海腎熒光素酶報告基因,該報告基因含SV40的啟動子及增強子,能高水平表達海腎熒光素酶基因??勺鳛闄z測轉染頻率的內對照,使實驗值可以規一化。

     

     

    2.熒光素酶檢測系統

    熒光素酶檢測系統 Dual-Luciferase?Reporter 1,000 Assay System 借助這一系統,可以對實驗進行精確的分析。

    熒光素酶檢測儀器 Lumat LB9507熒光檢測儀 提供在一般實驗中最好的靈敏度及應用性。軟件內建DLReady雙報導基因檢測程序,最適合于報導基因檢測的儀器。
    ◆超靈敏偵測儀,檢測極限可達10-18mole ATP
    ◆雙管式偵測室設計,提高一倍的實驗效率
    ◆專利噴射式分注器,準確加樣的同時達到混合樣品的作用

     

    ■雙熒光素酶報告基因系統的實驗步驟

    1.構建含promotor/TRE序列的螢火蟲熒光素酶報告基因載體;

    2.檢測陽性菌落,測序;

    3.提取純化不含內毒素的重組螢火蟲熒光素酶報告基因載體;

    4.用構建好的質粒轉染宿主細胞,使用雙熒光素酶報告基因檢測系統,利用靈敏的Bethord 公司的Lumat LB9507熒光檢測儀來檢測細胞內報告基因的熒光強度,從而對轉錄因子進行活性分析;在我們的檢測系統中,兩種熒光素酶可在單個樣品中連續測量,連續兩次的檢測可在4秒鐘時間內完成,我們檢測的線性范圍均在10-18摩爾的靈敏度范圍以內

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